因紙具有通過毛細作用自然吸液的能力，紙基微流控技術消除了對泵和其它流體流量儀表的需求。

同時因低成本，易攜帶和一次性使用的優點，紙基微流控技術與核酸檢測相結合在病原體 “樣品－答案” 檢測中贏得廣泛關注。

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如圖 1 所示，本文開發一種將所有板堆疊并裝訂成“書”狀結構的電化學紙微裝置，通過簡單翻轉面板操作可依次完成樣品制備，LAMP 擴增和電化學檢測。

本文采用蠟印刷濾紙將加熱熔化印刷的蠟形成疏水通道和通孔，采用具有高流速、低蛋白質吸附特性的玻璃纖維用于核酸提取。

在核酸提取和純化后，采用商用電爐加熱，在封閉的擴增腔內進行 LAMP 反應。

在 LAMP 擴增結束后，將紙基電化學單元的電極連接至恒電位儀，并測定氧化還原電流。通過在氧化還原活性分子亞甲基藍（MB）和雙鏈 LAMP 反應產物之間進行的電化學詢問來檢測 LAMP 擴增信號。

電化學方法、熒光法介紹可參考：常見等溫擴增產物檢測方法、電化學傳感器在體外診斷中的應用。

該電化學微裝置由以下幾部分組成：

(1) 吸收板 (圖 1, 板 1＆2)

(2) 提取板 (圖 1，板 3)

(3) 擴增板

(4) 紙基電化學單元 (圖 1，板 4＆5) 組成

圖 1 折疊式紙基微流體裝置

圖 1 中深色和灰色區域印有疏水性蠟。該器件包括五個面板 (1-5) 和一個用作 LAMP 反應腔的塑料板，以避免反應過程中試劑蒸發。

電化學紙基微裝置制作

本文采用二維或三維軟件設計紙微裝置的蠟打印圖案形狀。只需使用蠟打印機結合加熱板 (也可以用于 LAMP 反應加熱)，即可在沒有專門設施或無塵室的情況下進行芯片制作。

紙基電化學單元（圖 1 A，板 4＆5）采用絲網印刷電極結合蠟打印技術制作而成。

板 4 的圓形親水區被用于絲網印刷碳對電極和 Ag/AgCI 參比電極，板 5 的圓形親水區被用于制造金納米復合改性的紙陰極 (Au-PCE)。

裸紙和 Au-PCE 的 SEM 圖像如圖 3 所示，其中 (A) 為裸紙 SEM 圖像，(B) 為裸紙SEM放大圖像，(CD)為Au-PCE圖。

圖3

玻璃纖維圓盤手動固定到玻璃纖維盤孔內 (板 3)和擴增腔內，以便通過適當的折疊操作即可輕松的轉移試劑與樣品。

最后，使用醋酸膜或保鮮膜密封器件，以防止擴增過程中液體的蒸發。

“書”狀結構如圖 4 所示。

圖4

電化學紙基微裝置操作流程

圖 5 為“樣品－答案”的整個檢測過程。

翻轉板 3 和 4 (圖 5A)，將樣品和清洗緩沖液依次滴加到玻璃纖維圓盤 (板 3) 上，以進行細胞裂解和 DNA 提取(圖 5B)。

面板 1 和 2 用于通過毛細作用吸收細胞裂解物，純化的 DNA 被吸附在板 3 玻璃纖維圓盤上。

圖 5

為了將吸附的 DNA 從玻璃纖維圓盤轉移到擴增腔內的圓盤中 (塑料板)，將板 3 翻轉到板 4 上 (圖 5C)，然后將洗脫緩沖液滴加到玻璃纖維圓盤上 (圖 5D)。

在 DNA 洗脫后，將板 3 翻轉到相對的一側 (圖 5E)，并用密封膜將板 4，塑料板和板 5 密封，以防止溶液在擴增過程中蒸發(圖 5F)。

在 LAMP 反應之前，先將紙基電化學單元(板 4 和 5)的電極連接到電化學工作站上，在室溫下進行 3 次電化學測量。

在 LAMP 反應結束時，將微裝置從電爐中移下來，并在微裝置冷卻至室溫后測量三次電化學信號(圖 5F)。

審核編輯：劉清